DPPH法是最常用、最普及的抗氧化能力测定方法之一[1]。DPPH是一种稳定的氮中心自由基，其甲醇溶液呈深紫色，在515 nm处有最大吸收。样本中所含抗氧化成分通过提供氢原子或电子，可以将DPPH自由基还原为黄色的DPPH-H（肼），发生脱色反应，使溶液吸光度降低，吸光度下降程度与抗氧化活性呈正相关[2]。该法操作简便、快速、成本低，但具有局限性，其在于DPPH自由基主要溶于有机溶剂，对亲水性抗氧化剂的样本检测不够友好，且该自由基为人工合成的氮中心自由基，与生物体内以氧原子为中心的自由基（如ROS）在化学本质上不同[3]。

ABTS法是目前与DPPH法并列应用最广泛的抗氧化能力测定方法之一[4]。ABTS与氧化剂反应生成蓝绿色的阳离子ABTS⁺自由基，在734 nm处有最大吸收。样本中所含抗氧化成分能与ABTS⁺发生反应使其还原褪色，溶液吸光度的下降程度与抗氧化活性呈正相关[5]。与DPPH法相比，ABTS法最大的优势在于其适用性更广——既可水相中检测亲水性抗氧化剂，也可在有机相中检测亲脂性抗氧化剂[5]。然而，该法同样使用人工合成的氮中心自由基，存在生物学相关性不足的局限性[6]。同时也有文章指出，某些酚类抗氧化剂可与ABTS⁺形成偶联加合物，这种特异性反应可能导致不同抗氧化剂之间的测定结果缺乏可比性[4]。

FRAP法是典型的单电子转移（SET） 方法，原理与直接清除自由基的DPPH和ABTS法不同。在酸性条件下，样本中所含抗氧化成分将无色的Fe³⁺-TPTZ（三吡啶三嗪）复合物还原为蓝色的Fe²⁺形式，在593 nm处最大吸收，吸光度增加程度与样品的还原能力（抗氧化能力）成正比[7]。该法操作简单、快速、重复性好，但局限性在于该方法反映的是抗氧化剂的还原能力而非对自由基的直接清除能力，且在非生理性的低pH条件下进行，与体内环境差异较大，限制了其与体内活性的关联[8]，此外某些含巯基的抗氧化剂对该法不响应[9]。

PTIO法是一种较新的、基于氧中心自由基模型的抗氧化能力测定方法。PTIO是一种稳定的氮氧自由基，其水溶液呈蓝色，在557 nm附近有最大吸收峰。样品中所含的抗氧化成分与PTIO发生反应使反应体系褪色，溶液吸光度的下降程度与抗氧化活性呈正相关[10]。该法核心优势在于所使用的自由基类型与生物体内氧中心活性氧（ROS）具有更高的相关性，从而弥补了DPPH和ABTS法使用氮中心自由基方法在生物学相关性方面的理论不足。同时PTIO法的反应通常在生理pH的水溶液中进行，条件温和、体系干扰较小[10]。其局限性在于作为一种较新的方法，其普适性和应用的广泛性尚不及前三种方法，相关研究的积累相对较少。

综上所述，DPPH、ABTS、FRAP与PTIO四种方法虽均用于总抗氧化能力的测定，但在化学原理上各有侧重。DPPH与ABTS法操作简便，检测通量高，适用于大规模样品的快速筛查；FRAP法通过测定还原能力间接反映抗氧化水平，重复性良好；PTIO法则在自由基类型上更接近生理条件，是对现有方法体系的重要补充。由于不同方法在反应介质、电子转移路径及显色机制上的差异，单一指标很难客观反映样品整体活性。因此，在对样本进行抗氧化能力的测定时，应根据样品特性和研究目标，选用多种方法进行分析验证，以做出更全面、客观的评价。